miRNA質(zhì)粒載體 

MicroRNA（miRNA）是一類真核生物內(nèi)源性的小分子單鏈RNA，通常長(zhǎng)為18~25nt，能夠通過(guò)與靶mRNA特異性的堿基配對(duì)結(jié)合，引起靶序列降解或抑制其翻譯，從而對(duì)基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后的表達(dá)調(diào)控。

MicroRNA 表達(dá)載體構(gòu)建

MicroRNA（miRNA）是一類真核生物內(nèi)源性的小分子單鏈RNA，通常長(zhǎng)為18~25nt，能夠通過(guò)與靶mRNA特異性的堿基配對(duì)結(jié)合，引起靶序列降解或抑制其翻譯，從而對(duì)基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后的表達(dá)調(diào)控（如右圖所示）。SYNTHBIO MicroRNA載體利用CMV啟動(dòng)子可以在眾多哺乳動(dòng)物細(xì)胞中快速、高效、持續(xù)表達(dá)pre-miRNA，經(jīng)過(guò)Drosha（RNaseⅢ）作用形成small hairpin pre-miRNAs（約70nt），再過(guò)Dicer作用形成成熟的microRNA（約22nt），作用靶mRNA，起到表達(dá)調(diào)控作用。

microRNA過(guò)表達(dá)載體

SYNTHBIO提供兩種過(guò)表達(dá)的方式：

1. 從天然的基因組序列中表達(dá)pre-miRNA轉(zhuǎn)錄本構(gòu)建pre-microRNA。插入序列不僅包含pre-miRNA莖環(huán)結(jié)構(gòu)，同時(shí)構(gòu)建100-200bp長(zhǎng)的上下游兩端的側(cè)翼序列。使用使用pol-Ⅱ（如CMV）啟動(dòng)子，這種構(gòu)建方式保證高水平的表達(dá)pre-microRNA。表達(dá)出來(lái)的pre-miRNA的生理活動(dòng)盡可能接近天然狀態(tài)。

使用這種構(gòu)建方式，客戶只需提供miRNA的具體信息及指定過(guò)表達(dá)載體類型（如SYNTHBIOpEX系列 M核過(guò)表達(dá)載體?，我們完成序列合成，質(zhì)粒構(gòu)建。

2. 利用SYNTHBIO優(yōu)化過(guò)的載體，模擬內(nèi)源miRNA-155的表達(dá)模塊，這種構(gòu)建方法解決了不同miRNA表達(dá)效率差異的問(wèn)題，同時(shí)也有效的避免了有些內(nèi)源miRNA表達(dá)時(shí)產(chǎn)生-3p，-5p的問(wèn)題。miRNA的發(fā)夾序列融合在EGFP報(bào)告基因的后面，模擬miRNA在體內(nèi)的成熟過(guò)程。

備注：保證插入序列正確，不保證miRNA的過(guò)表達(dá)效率，不保證轉(zhuǎn)染效率。所有實(shí)驗(yàn)僅供科研使用。

microRNA抑制子表達(dá)載體

SYNTHBIO提供兩種miRNA抑制子載體構(gòu)建的方式：


1. ;)PAN>利用SYNTHBIO優(yōu)化過(guò)的載體，模擬內(nèi)源miRNA-155的表達(dá)模塊，來(lái)表達(dá)miRNA inhibitor序列。這種構(gòu)建與SYNTHBIO miRNA過(guò)表達(dá)方式2使用同樣的載體系統(tǒng)，方便客戶使用同一套系統(tǒng)完成miRNA的過(guò)表達(dá)與抑制。
使用這種構(gòu)建方式，客戶只需提供miRNA的具體信息，我們完成序列合成，質(zhì)粒構(gòu)建。

miRNA sponge的特點(diǎn)：

a. 由于miR Sponges是由質(zhì)粒編碼的，它能夠通過(guò)真核表達(dá)載體達(dá)到穩(wěn)定沉默細(xì)胞microRNA的目的；
b. 能夠沉默整個(gè)家族的microRNA以達(dá)到對(duì)整個(gè)家族microRNA功能的研究；
c. 可以利用miR Sponges實(shí)現(xiàn)體內(nèi)外loss of function研究；
d. 可以用來(lái)檢測(cè)luciferase靶基因報(bào)告系統(tǒng)分析；
e. 可以自由組合串聯(lián)不同miRNA抑制子序列，達(dá)到沉默多種不同miRNA的目的。
使用這種構(gòu)建方式，客戶需提供miRNA的具體信息、預(yù)構(gòu)建miRNA inhibitor的重復(fù)數(shù)及預(yù)構(gòu)建inhibitor的序列信息，我們完成序列合成，質(zhì)粒構(gòu)建。

SYNTHBIO公司已經(jīng)利用自己的miRNA載體骨架成功構(gòu)建為數(shù)眾多的miRNA的過(guò)表達(dá)載體，載體庫(kù)中的miRNA expression vectors 1周之內(nèi)即可出貨，價(jià)格更優(yōu)。

2. miRNA sponge（海綿）載體構(gòu)建：SYNTHBIO通過(guò)構(gòu)建載體，表達(dá)包含多個(gè)成熟miRNA結(jié)合位點(diǎn)的RNA序列，通過(guò)吸附結(jié)合成熟miRNA，從而抑制miRNA的作用，從而進(jìn)行功能缺失性研究。

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